久久久亚洲欧洲日产国码农村 I 欧美成妇人吹潮在线播放 I 久久夜靖品 I 日韩www. I 麻豆亚洲一区 I 国产精品久久久久野外 I 国产亚洲精品久久77777 I 国产区一区二区 I 天堂网wwww I 久欠精品国国产99国产精2021 I 秋霞av国产精品一区 I 特黄毛片杨钰莹 I 95香蕉视频 I 日韩在线精品 I 国产91精品久久久久久久网曝门 I 久久天天躁狠狠躁夜夜爽蜜月 I 免费在线观看黄 I 日本伊人色综合网 I 天堂av8 I 国产裸体丰满白嫩大尺度尤物可乐

雞傳染性支氣管炎抗體ELISA試劑盒說明書

本試劑僅供研究使用       目的：本試劑盒用于測定雞血清，血漿及相關(guān)液體樣本中傳染性支氣管炎抗體水平。高品質(zhì)ELISA試劑盒供應(yīng)商，品質(zhì)，售后完善。歡迎垂詢，并提供免費(fèi)代檢測服務(wù)。

實(shí)驗(yàn)原理：

  本試劑盒采用雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法（ELISA）測定標(biāo)本中雞傳染性支氣管炎抗體。用純化的雞傳染性支氣管炎抗原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中雞傳染性支氣管炎抗體相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后再與HRP標(biāo)記的雞傳染性支氣管炎抗原結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標(biāo)本中雞傳染性支氣管炎抗體的存在與否。

試劑盒組成：

樣本處理及要求：

1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。

2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。

3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟：

1. 編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號，每板應(yīng)設(shè)陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）

2. 加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。 

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

結(jié)果判定：

  試驗(yàn)有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.15

  臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.20

  陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為雞傳染性支氣管炎抗體陰性

  陽性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為雞傳染性支氣管炎抗體陽性

注意事項

1．操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，本試劑不同批號組分不得混用。

2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

3．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物請避光保存。

6．試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，使用雙波長檢測時，參考波長為630nm

7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M的硫酸，使用時必須注意安全。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個月

本公司專業(yè)銷售各種品牌價格檔次的ELISA試劑盒。服務(wù)于高校及免疫學(xué)科研單位。*，售后服務(wù)完善。并可以免費(fèi)代檢測，更好的為您服務(wù)。