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RAW 264.7 小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞

Mouse Monocyte - macrophage Leukemia Cells ,RAW264.7

貨號：YJ-m047（種屬鑒定）

價格： 1350.0

規(guī)格： 1*10⁶ 

細(xì)胞描述

此細(xì)胞株源自Abelson鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤。sIg-, Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原陰性。此細(xì)胞株不分泌可檢測到的病毒顆粒，XC斑點形成試驗陰性?？梢园嬛行约t并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖?？梢钥贵w依賴性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細(xì)胞。LPS或PPD處理2天可誘導(dǎo)分解紅血球但對腫瘤靶細(xì)胞無作用。

細(xì)胞特性

1） 來源：鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤；單核細(xì)胞；巨噬細(xì)胞

2） 形態(tài)：不規(guī)則圓形，紡錘狀，貼壁細(xì)胞，少量懸浮。

3） 含量：>1x10^6  細(xì)胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5） 用途：僅供科研使用。

運輸和保存

干冰運輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

細(xì)胞接收后的處理

1）收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。

2）請在4或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3）半貼細(xì)胞或貼壁不牢（懸?。┘?xì)胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱中約2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的情況，若細(xì)胞密度在60%以下，客戶需收集T25瓶中的懸浮細(xì)胞離心后用完全培養(yǎng)基重懸后打回到原培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，若細(xì)胞生長70%-90%對細(xì)胞進(jìn)行傳代，傳代時需要收集培養(yǎng)基中懸浮的細(xì)胞離心后回收。

4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。 

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備DMEM(包含2mM L-谷氨酰胺，0.11g / L丙酮酸鈉) (推薦YJ-0001)培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清10 %；P/S青霉素-鏈霉素 1%。

2） 注意事項：

（a）在細(xì)胞生長的初始階段，細(xì)胞以貼壁的形式生長并呈現(xiàn)出長方體的形態(tài)和有“偽足"延伸。隨著培養(yǎng)時間的增加，細(xì)胞呈現(xiàn)圓形并以疊加的形式生長。細(xì)胞密度達(dá)到一定的程度，會有細(xì)胞以懸浮的方式散落到到培養(yǎng)基中，鏡下觀察會發(fā)現(xiàn)懸浮和貼壁的細(xì)胞會同時出現(xiàn)。

（b）該細(xì)胞傳代時不需要用胰酶消化。傳代時，用無菌細(xì)胞刮刮拭培養(yǎng)表面將細(xì)胞刮落，收集離心后重懸接種到新的培養(yǎng)瓶中。

（c）該細(xì)胞形態(tài)上包含松散貼壁的紡錘形和圓形或者立方形。當(dāng)細(xì)胞密度較大時，細(xì)胞會輕微脫落變圓或者許多細(xì)胞堆積在一起，有些細(xì)胞甚至脫落漂浮。這些漂浮的細(xì)胞是存活的，在傳代時應(yīng)收集起來，離心后細(xì)胞沉淀可以繼續(xù)培養(yǎng)。（d）血清質(zhì)量差異可能引起細(xì)胞貼壁能力變化，應(yīng)選用高質(zhì)量的胎牛血清。

3） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

4） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)70%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

該細(xì)胞為懸浮和輕微的貼壁細(xì)胞，傳代可以參考以下方法：

該細(xì)胞用細(xì)胞刮鏟替代胰酶來對細(xì)胞進(jìn)行處理。用無菌細(xì)胞刮鏟刮拭細(xì)胞附著培養(yǎng)表面將細(xì)胞刮落，收集細(xì)胞后離心去上清，重懸后接種到新的裝有新鮮培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶內(nèi)。收貨后第一次傳代1:2進(jìn)行，后續(xù)可以根據(jù)實際的情況以1:2~1:4的比例進(jìn)行傳代。

3） 細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實驗使用。

下面T25瓶為例；

1. 1，細(xì)胞用細(xì)胞刮鏟替代胰酶來對細(xì)胞進(jìn)行處理。用無菌細(xì)胞刮鏟刮拭細(xì)胞附著培養(yǎng)表面將細(xì)胞刮落，收集細(xì)胞。

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10^6~1×107個活細(xì)胞/ml分配到一個凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項

1.收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

2.收到細(xì)胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀察記錄細(xì)胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)。

3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?，故本公司只保證客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài)，故客戶需要售后時需出示收到細(xì)胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時間證明，期間間隔時間不能大于7天。

4.所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

從2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實驗技術(shù)及論文潤色服務(wù)，協(xié)助客戶各類實驗服務(wù)及論文潤色十余年，是您值得信賴的科研合作伙伴!

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